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小鼠ELISA試劑盒使用對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣

更新時(shí)間：2022-05-13

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　　小鼠ELISA試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中小鼠白細(xì)胞介素水平。用純化的小鼠白細(xì)胞介素8抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入白細(xì)胞介素，再與HRP標(biāo)記的白細(xì)胞介素8抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的白細(xì)胞介素8呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中小鼠白細(xì)胞介素濃度。

　　小鼠ELISA試劑盒標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：

　　在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔，在一、二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl，然后在一、二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；

　　然后從一孔、二孔中各取100μl分別加到三孔和四孔，再在三、四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；

　　然后在三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到五、六孔中，再在五、六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul，混勻；

　　混勻后從五、六孔中各取50μl分別加到七、八孔中，再在七、八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從七、八孔中分別取50μl加到九、十孔中，再在九、十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從九、十孔中各取50μl棄掉。

　　加樣時(shí)分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。